胚胎干细胞来源的sEVs调节Treg保护缺血性中风

【关键词】胚胎干细胞来源的小细胞外囊泡（ESC-sEVs）、免疫调节、缺血性中风、神经炎症、调节性T细胞（Tregs） 【摘要】干细胞来源的小细胞外囊泡（sEVs）可促进中风后的神经恢复。近期有报道研究了胚胎干细胞来源sEVs的修复能力，但是ESC-sEVs对中风的修复作用尚未报道。缺血性中风后，免疫反应在病理过程中发挥重要作用，因此本研究聚焦于ESC-sEVs对免疫反应的调节作用。静脉注射ESC-sEVs可明显减少缺血性中风后白细胞的浸润、炎症因子表达、神经死亡和病变体积、促进长期功能恢复。ESC-sEVs也可调节Tregs细胞，蛋白组学分析显示ESC-sEVs中TGF-β、Smad2、Smad4蛋白丰富，通过TGF-β/Smad途径调节Tregs细胞。  

【前言】免疫反应在缺血性中风的病理过程中发挥重要作用。脑内血管堵塞后，小胶质细胞激活，炎症介质分泌，白细胞浸润。调节免疫反应是治疗缺血性中风的有效治疗手段，抑制白细胞浸润可促进功能恢复，而Tregs细胞在神经退行性疾病中也发挥保护作用。近期的研究中，Tregs在脑缺血疾病中发挥免疫调节作用，Tregs可减少中风后神经缺损，增加Tregs可促进神经功能恢复，抑制神经炎症，促进血脑屏障的完整性恢复等作用。
小细胞外囊泡sEVs双层膜结构，包裹蛋白、脂质、核酸和其他生物分子等。sEVs相对于细胞移植治疗，有较小的免疫原性、血栓形成风险小、可透过血脑屏障。目前sEVs可来源于多种干细胞（间充质干细胞、神经干细胞、胚胎干细胞），ESC-sEVs可促进心肌修复和心脏功能恢复，不仅如此，ESC-sEVs也可促进CNS中神经发生，因此ESC-sEVs可作为神经系统疾病的潜在治疗方式。
MSC-sEVs可通过免疫调节的方式调节神经炎症，促进中风的恢复。因此本研究评估ESC-sEVs能否通过调节Tregs来发挥治疗作用。
【结果】
鉴定ESCs（ALP、OCT4、Tra-1-60、Nanog、SSEA4），TEM、WB表征ESC-sEVs。

评估ESC-sEVs不同剂量的疗效，挑选zui佳浓度注射后检测脑血流量、神经功能、梗死面积、TUNEL检测神经元凋亡。
MRI和行为学评估ESC-sEVs的长期疗效。
流式检测免疫细胞浸润，检测炎症因子表达情况，并同时评估神经元的凋亡。
体内外探究ESC-sEVs对Tregs细胞影响，体外分离脾Treg细胞与ESC-sEVs共培养后检测Tregs细胞变化，体内注射ESC-sEVs后流式检测Treg变化。
CD25单抗清除Tregs细胞后验证ESC-sEVs是通过Tregs细胞发挥作用的。流式检测各种免疫细胞浸润情况。
对ESC-sEVs进行蛋白组学分析检测下游机制。