miR26a靶向SHC4、PFDN4、CHORDC1调节前列腺癌细胞分泌细胞外囊泡
613 人阅读发布时间:2021-06-07 11:49
【关键词】细胞外囊泡、miR26a、SHC4、PFDN4、CHORDC1
【摘要】细胞外囊泡EV调节癌症进展,但是癌细胞的EVs生物发生机制尚不清楚,miRNA可逆调节EVs的分泌。高通量筛选潜在的调节EVs分泌的miRNA,结果显示miR26a通过下游靶基因SHC4、PFDN4、CHORDC1调节EVs分泌。
文章结构简单,但创新性非常好。
【前言】EVs通过递送miRNAs、mRNAs、蛋白、脂质等进入受体细胞,在生理和病理情况下发挥作用。近期有报道称减少癌细胞来源的EVs可抑制癌症细胞增殖,因此研究癌细胞的EVs分泌机制有助于寻找新的治疗靶点。miRNAs与肿瘤发生和转移密切相关,癌细胞中miRNA与mRNA相互作用,调节RNA的分子网络,进而导致肿瘤进展和转移。高利用通量筛选,鉴定调节前列腺癌细胞EVs分泌的miRNA。
【结果】
PC3前列腺癌细胞种96孔板,转染不同的miRNA,之后提取细胞外囊泡EVs并进行表征。MTS实验排除miRNA对细胞增殖的干扰,以siRNA作为对照评估转染效率。从miRNA库中筛选与EV分泌相关的miRNA,同时也从公共数据库中筛选临床相关的调节EVs分泌的miRNA,结果显示:miR26a可调节EVs的分泌。
探究miR26a下游机制,不同前列腺癌细胞转染miR26a后分析差异表达的mRNA,利用TargetScan寻找可能的靶基因,利用siRNA干扰可能的靶基因进行验证,测定EVs的含量以及对细胞增殖的影响,筛选出miR26a潜在的靶点,并进行qRT-PCR、WB验证。结果显示:SHC4、PFDN4、CHORDC1是miR26a的靶点,调控EVs的分泌。
荧光报告素酶实验检测靶基因是否是miR26a的直接作用靶点,并且从数据库中验证靶基因在肿瘤组织中表达。
体内评估miR26a下游基因在前列腺癌来源的EVs中的作用。ShRNA敲低三个基因后检测癌症发生、肿瘤体积和重量。结果显示:miR26a可通过三个靶基因调节EVs的分泌,发挥抗瘤作用。