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公司新闻/正文
多发性骨髓瘤细胞内吞途径抑制后，EVs介导的对硼替佐米化学敏感性降低
1109 人阅读发布时间：2021-06-02 11:24
【关键词】化疗敏感性、内吞作用、外泌体、细胞外囊泡、多发性骨髓瘤
【摘要】骨髓MSC来源细胞外囊泡EVs在多发性骨髓瘤MM的进展和耐药中起关键作用，而EVs的摄取依赖于EVs的来源和受体细胞。本实验探究MM细胞摄取BMSC-sEVs的机制以及评估其抗肿瘤作用。BMSC-sEVs可被MM细胞摄取，促进MM细胞增殖，降低其化疗敏感性。内吞抑制剂可减少MM细胞摄取BMSC-sEVs，降低内吞相关蛋白，增加MM细胞的化疗敏感性，shRNA敲低内吞相关蛋白后可减少sEVs的摄取，增加MM细胞的化疗敏感性。
【前言】
EVs通过递送蛋白、脂质、mRNAs、miRNAs发挥作用，正常细胞或肿瘤细胞来源的EVs能调节骨髓BM微环境，而EVs必须被细胞摄取才能发挥作用，细胞摄取EVs的方式有：膜融合、内吞作用、吞噬作用、巨胞饮作用。阐明EVs整合进细胞的过程有助于理解EVs的作用和功能。
MM细胞和BM来源的细胞间交流对MM进展有影响，其中BMSCs可促进MM细胞生长和耐药，而BMSCs细胞也可与其他免疫细胞相互作用，影响BM的微环境。鉴于BMSC-EVs可促进MM的进展，因此阐明MM细胞整合sEVs的机制有助于研发治疗MM的新策略。
【结果】
骨髓瘤MM患者来源的BMSCs体外培养提取外泌体sEVs，TEM和NTA鉴定sEVs大小和形态，WB鉴定sEVs的marker。将DID标记sEVs后与不同MM细胞系共培养，免疫荧光检测MM细胞对sEVs的整合情况。结果显示：MM细胞以剂量依赖性方式摄取sEVs。
对整合EVs的不同MM细胞系进行流式周期检测，对不同分裂期的MM细胞对EVs摄取情况，结果显示：分裂期MM细胞对sEVs的摄取增加。
检测BMSC-sEVs对MM细胞存活和耐药的影响。结果显示：BMSC-sEVs明显提高MM细胞对硼替佐米的耐药。
各种内吞抑制剂处理MM细胞，DID标记sEVs后检测MM细胞对sEVs的整合，同时检测内吞抑制剂对细胞存活的影响，挑选对细胞杀伤作用小但能抑制内吞效应的内吞抑制剂浓度，进一步检测MM细胞在内吞抑制剂存在下对sEVs的摄取情况。结果显示：网格蛋白和小窝蛋白介导的内吞作用参与MM细胞摄取sEVs。
抑制巨胞饮作用和膜融合检测MM细胞摄取sEVs是否通过这两种方式。结果显示：不同MM细胞系对sEVs的摄取利用不同方式。
shRNA抑制内吞相关蛋白，验证内吞相关蛋白介导MM细胞对sEVs的摄取是通过内吞相关蛋白介导内吞作用而发挥的。
Dynasore抑制剂对各种MM细胞摄取sEVs均有抑制作用，其下游特异性靶基因为DNM2，在原代MM细胞中验证其作用。提取病人原代MM细胞验证内吞抑制剂对sEVs的抑制作用。结果显示：Dynasore抑制剂明显抑制MM细胞摄取sEVs。
BMSC-sEVs减少MM的化疗敏感性，因此检测抑制MM细胞摄取sEVs后是否影响化疗敏感性。内吞抑制剂存在下检测MM细胞摄取sEVs后化疗敏感性。结果显示：内吞抑制剂Dynasore可增加硼替佐米的杀伤作用。
体内验证Dynasore抑制剂可提高MM小鼠化疗敏感性，延长生存期。
【摘要】骨髓MSC来源细胞外囊泡EVs在多发性骨髓瘤MM的进展和耐药中起关键作用，而EVs的摄取依赖于EVs的来源和受体细胞。本实验探究MM细胞摄取BMSC-sEVs的机制以及评估其抗肿瘤作用。BMSC-sEVs可被MM细胞摄取，促进MM细胞增殖，降低其化疗敏感性。内吞抑制剂可减少MM细胞摄取BMSC-sEVs，降低内吞相关蛋白，增加MM细胞的化疗敏感性，shRNA敲低内吞相关蛋白后可减少sEVs的摄取，增加MM细胞的化疗敏感性。
【前言】
EVs通过递送蛋白、脂质、mRNAs、miRNAs发挥作用，正常细胞或肿瘤细胞来源的EVs能调节骨髓BM微环境，而EVs必须被细胞摄取才能发挥作用，细胞摄取EVs的方式有：膜融合、内吞作用、吞噬作用、巨胞饮作用。阐明EVs整合进细胞的过程有助于理解EVs的作用和功能。
MM细胞和BM来源的细胞间交流对MM进展有影响，其中BMSCs可促进MM细胞生长和耐药，而BMSCs细胞也可与其他免疫细胞相互作用，影响BM的微环境。鉴于BMSC-EVs可促进MM的进展，因此阐明MM细胞整合sEVs的机制有助于研发治疗MM的新策略。
【结果】
骨髓瘤MM患者来源的BMSCs体外培养提取外泌体sEVs，TEM和NTA鉴定sEVs大小和形态，WB鉴定sEVs的marker。将DID标记sEVs后与不同MM细胞系共培养，免疫荧光检测MM细胞对sEVs的整合情况。结果显示：MM细胞以剂量依赖性方式摄取sEVs。
对整合EVs的不同MM细胞系进行流式周期检测，对不同分裂期的MM细胞对EVs摄取情况，结果显示：分裂期MM细胞对sEVs的摄取增加。
检测BMSC-sEVs对MM细胞存活和耐药的影响。结果显示：BMSC-sEVs明显提高MM细胞对硼替佐米的耐药。
各种内吞抑制剂处理MM细胞，DID标记sEVs后检测MM细胞对sEVs的整合，同时检测内吞抑制剂对细胞存活的影响，挑选对细胞杀伤作用小但能抑制内吞效应的内吞抑制剂浓度，进一步检测MM细胞在内吞抑制剂存在下对sEVs的摄取情况。结果显示：网格蛋白和小窝蛋白介导的内吞作用参与MM细胞摄取sEVs。
抑制巨胞饮作用和膜融合检测MM细胞摄取sEVs是否通过这两种方式。结果显示：不同MM细胞系对sEVs的摄取利用不同方式。
shRNA抑制内吞相关蛋白，验证内吞相关蛋白介导MM细胞对sEVs的摄取是通过内吞相关蛋白介导内吞作用而发挥的。
Dynasore抑制剂对各种MM细胞摄取sEVs均有抑制作用，其下游特异性靶基因为DNM2，在原代MM细胞中验证其作用。提取病人原代MM细胞验证内吞抑制剂对sEVs的抑制作用。结果显示：Dynasore抑制剂明显抑制MM细胞摄取sEVs。
BMSC-sEVs减少MM的化疗敏感性，因此检测抑制MM细胞摄取sEVs后是否影响化疗敏感性。内吞抑制剂存在下检测MM细胞摄取sEVs后化疗敏感性。结果显示：内吞抑制剂Dynasore可增加硼替佐米的杀伤作用。
体内验证Dynasore抑制剂可提高MM小鼠化疗敏感性，延长生存期。