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文献分享：外泌体装载miRNA
2034 人阅读发布时间：2022-03-22 15:55
EVs 可以装载的药物包括化疗药物和核酸，例如信使 RNA（ mRNA）， miRNA，小干扰 RNA（ siRNA）和小核仁 RNA（ snoRNA）。 EVs 的来源，分离方法，标记方法以及给药途径都会影响药物递送。分离出 EVs 后，可以通过物理或者化学法装载药物的方法有： 超声法、混和共培养、电穿孔、冻融循环、挤压、皂素透化、转染试剂（包括脂质体）、Cacl2。以下是1篇关于外泌体装载miRNA的文章，由研载生物继续为您解读。
关键词：
癌症治疗，化疗耐药，结直肠癌，药物递送，外泌体，miR-204-5p
摘要：
细胞分泌的纳米级细胞外囊泡在细胞间的串扰中起着关键作用，是一种良好的生物相容性材料，可作为体内治疗的载体。已有研究表明miR-204-5p是一种关键的肿瘤抑制因子，可以抑制肿瘤的生长、转移和化疗耐药。因此，这项研究构建了一个稳定分泌高水平外泌体 miR-204-5p 的 HEK293T 细胞系来评估其对人类癌症的治疗价值。该研究发现外泌体miR-204-5p可以通过特异性抑制人类癌细胞中miR-204-5p的靶基因来有效抑制癌细胞增殖，诱导细胞凋亡并增加化学敏感性。
前言：
外泌体是纳米级的细胞外囊泡（30-150 nm），在生理或病理条件下几乎可以由所有类型的细胞分泌。外泌体通过富集和递送来自衍生细胞的核酸、蛋白质、代谢物或脂质来介导供体和受体细胞之间的细胞间通讯。据报道外泌体miRNA是癌症-宿主串扰的重要介质，癌细胞来源的外泌体miRNA可以调节远处细胞的功能和表型，特别是通过促进肿瘤微环境中各种细胞之间的串扰。多项研究证实了miR-204-5p 在不同类型的人类癌症中的肿瘤抑制作用。这些结果提示 miR-204-5p 是一种强大的泛癌抑制因子，恢复其表达可能是人类癌症治疗的一种有前景的策略。
结果：
该研究通过慢病毒转导构建稳定表达miR-204-5p（293T-miR-204）的HEK293T细胞系。荧光实时定量 PCR (qPCR)用于测量 miR-204-5p 的表达。蛋白质印迹验证这些外泌体中外泌体标志物（CD63 和 Flotillin-2）的蛋白质水平。结果表明：293T-204细胞和miR-204 EXO 中miR-204-5p的水平高于miR-204-3p，所以外泌体miR-204-3p对肿瘤细胞的影响可以忽略不计。
与293T-miR-204细胞来源的条件培养基 (CM) 或外泌体共培养后，miR-204-5p在CRC细胞中明显上调。
CCK-8和集落形成试验用于评价体外抗癌作用，流式细胞术用于检测细胞凋亡。为了进一步确定miR-204外泌体的肿瘤抑制功能，该研究检测了miR-204外泌体对其他癌症类型细胞增殖的影响，包括乳腺癌（MCF-7和MDA-MB-231）、肺癌（A549）、胃癌（SGC-7901) 和神经胶质瘤 (U251) 细胞。结果表明 miR-204外泌体是一种有效的泛癌抑制因子，可以抑制这些癌细胞的增殖。
据报道miR-204-5可以通过靶向Bcl2和RAB22A来抑制CRC细胞增殖和化学抗性。本研究使用化疗药物5-FU作为模型药物测试了 miR-204外泌体是否具有化学增敏作用。结果表明：外泌体miR-204-5p可以诱导细胞凋亡并增加癌细胞对化疗药物5-氟尿嘧啶的敏感性。
为了进一步评估外泌体miR-204-5p的体内治疗潜力，使用异种移植小鼠模型评估外泌体miR-204-5p的体内治疗效果。蛋白质印迹用于检测CD63、Flotillin-2、RAB22A和Bcl2的蛋白质水平。通过免疫组织化学染色测量肿瘤组织中RAB22A和Bcl2的蛋白水平。结果表明：外泌体miR-204-5p抑制了小鼠的肿瘤生长。在用外泌体 miR-204-5p处理的癌细胞或异种移植组织中，miR-204-5p靶标的蛋白质水平明显降低。
参考文献：Yao S, Yin Y, Jin G, Li D, Li M, Hu Y, Feng Y, Liu Y, Bian Z, Wang X, Mao Y, Zhang J, Wu Z, Huang Z. Exosome-mediated delivery of miR-204-5p inhibits tumor growth and chemoresistance. Cancer Med. 2020 Aug;9(16):5989-5998. doi: 10.1002/cam4.3248.
关键词：
癌症治疗，化疗耐药，结直肠癌，药物递送，外泌体，miR-204-5p
摘要：
细胞分泌的纳米级细胞外囊泡在细胞间的串扰中起着关键作用，是一种良好的生物相容性材料，可作为体内治疗的载体。已有研究表明miR-204-5p是一种关键的肿瘤抑制因子，可以抑制肿瘤的生长、转移和化疗耐药。因此，这项研究构建了一个稳定分泌高水平外泌体 miR-204-5p 的 HEK293T 细胞系来评估其对人类癌症的治疗价值。该研究发现外泌体miR-204-5p可以通过特异性抑制人类癌细胞中miR-204-5p的靶基因来有效抑制癌细胞增殖，诱导细胞凋亡并增加化学敏感性。
前言：
外泌体是纳米级的细胞外囊泡（30-150 nm），在生理或病理条件下几乎可以由所有类型的细胞分泌。外泌体通过富集和递送来自衍生细胞的核酸、蛋白质、代谢物或脂质来介导供体和受体细胞之间的细胞间通讯。据报道外泌体miRNA是癌症-宿主串扰的重要介质，癌细胞来源的外泌体miRNA可以调节远处细胞的功能和表型，特别是通过促进肿瘤微环境中各种细胞之间的串扰。多项研究证实了miR-204-5p 在不同类型的人类癌症中的肿瘤抑制作用。这些结果提示 miR-204-5p 是一种强大的泛癌抑制因子，恢复其表达可能是人类癌症治疗的一种有前景的策略。
结果：
该研究通过慢病毒转导构建稳定表达miR-204-5p（293T-miR-204）的HEK293T细胞系。荧光实时定量 PCR (qPCR)用于测量 miR-204-5p 的表达。蛋白质印迹验证这些外泌体中外泌体标志物（CD63 和 Flotillin-2）的蛋白质水平。结果表明：293T-204细胞和miR-204 EXO 中miR-204-5p的水平高于miR-204-3p，所以外泌体miR-204-3p对肿瘤细胞的影响可以忽略不计。
参考文献：Yao S, Yin Y, Jin G, Li D, Li M, Hu Y, Feng Y, Liu Y, Bian Z, Wang X, Mao Y, Zhang J, Wu Z, Huang Z. Exosome-mediated delivery of miR-204-5p inhibits tumor growth and chemoresistance. Cancer Med. 2020 Aug;9(16):5989-5998. doi: 10.1002/cam4.3248.