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公司新闻/正文
【Biomedicines】苹果外泌体确实有让你“远离医生”的能力
1006 人阅读发布时间：2022-06-15 16:16
大家应该都听过“一天一个苹果，医生远离我”这句俗语，父母长辈也会经常叮嘱我们“多吃水果蔬菜比什么都好”，除了白雪公主，她可能会对苹果的使用有一些误解之外，像水果、蔬菜、植物天然提取物一直都被认为是可以治疗人类健康疾病的药物。当然，这其中一定是有些理论依据的。今天分享给大家的这篇文献，其研究目的就是从生物学的角度探究苹果外泌体在人类细胞炎症过程中的潜在作用机制，相关研究成果发表在Biomedicines期刊上，IF:6.081。
技术路线：
研究结果：
1. ADNVs表征
从新鲜苹果(Malus domestica)中分离得到苹果外泌体(ADNVs)并对其进行粒径分布分析和透射电镜分析。粒径显示ADNVs平均半径为152±32.3nm，电镜显示形貌均匀，呈圆形。
2. ADNVs的吸收
对ADNVs进行PKH26染色，利用荧光显微镜对其与活细胞的相互作用进行定性分析，在THP-1细胞质和作为受体细胞的成纤维细胞(FU)上，红色的ADNVs呈斑点状存在。SEM分析细胞的形态学变化，对照组更像融合，而ADNVs处理的样品有更分散的细胞质，纺锤状形态与激活的M1巨噬细胞有关，而更圆更宽的形状则表明M2表型是交替激活的。通过免疫荧光染色对巨噬细胞1型标记物进行评价，细胞质内出现的红色荧光证实了I型巨噬细胞能摄取ADNVs。
3. ADNVs对细胞活力的影响
将Thp-1来源的巨噬细胞、NCTC L929细胞与分离的ADNVs孵育24h。MTT实验测定细胞活力，显示ADNVs处理的THP-1样品组活细胞比例明显高于对照组，NCTC L929细胞吸光度值基本相同。接下来测定细胞内外乳酸脱氢酶(LDH)活性，观察其对细胞膜损伤的影响。结果显示LDH在两种细胞类型中都很好的存在，在细胞外环境中则完全不存在，证实了ADNVs没有诱导任何类型的细胞损伤。
4. 差异miRNA表达分析与T靶基因预测
在6个样本中，通过下一代测序(NGS)鉴定出miRNAs，筛选差异表达的miRNAs，并比较差异表达miRNAs的基因靶标。其中连接最多的节点是miR-146a-5p，其次是miR-30a-5p。
通过RT-qPCR检测ADNVs处理48小时和对照组中促炎(M1)表型极化标记基因的表达。以IL-8和IL-1b为M1标记。在ANDVs处理的样本中，IL-8和IL-1b均显著下调。TNFα可诱导IL-1b和IL-8炎症因子的表达，在生长培养基中加入(+TNFα)和不添加(-TNFα)的情况下，研究基因调控。结果显示，在有炎症和无炎症的情况下，adnvs处理的样本中IL-1b的相对表达均出现下调。然而，IL-8水平在+TNFα和adnvs处理的样本中显著升高，在-TNFα样本中相同。
综上，ANDVs具有的抗炎作用主要由miRNA-146a通过抑制NF-kb通路负向调节促炎细胞因子的产生.
总结：
本研究测试了ADNVs的生物学特性和生物学效应，证实了ADNVs治疗的安全性。ADNVs可从不同角度发挥作用，在多个细胞系中诱导抗炎症信号，显示出与免疫系统直接对话的能力，具有很高的临床潜力。基于研究结果推测，每天摄入苹果可以摄入小剂量的天然抗炎物质，确保炎症过程的控制，尤其是在炎症初期。
技术路线：
1. ADNVs表征
从新鲜苹果(Malus domestica)中分离得到苹果外泌体(ADNVs)并对其进行粒径分布分析和透射电镜分析。粒径显示ADNVs平均半径为152±32.3nm，电镜显示形貌均匀，呈圆形。
2. ADNVs的吸收
对ADNVs进行PKH26染色，利用荧光显微镜对其与活细胞的相互作用进行定性分析，在THP-1细胞质和作为受体细胞的成纤维细胞(FU)上，红色的ADNVs呈斑点状存在。SEM分析细胞的形态学变化，对照组更像融合，而ADNVs处理的样品有更分散的细胞质，纺锤状形态与激活的M1巨噬细胞有关，而更圆更宽的形状则表明M2表型是交替激活的。通过免疫荧光染色对巨噬细胞1型标记物进行评价，细胞质内出现的红色荧光证实了I型巨噬细胞能摄取ADNVs。
3. ADNVs对细胞活力的影响
将Thp-1来源的巨噬细胞、NCTC L929细胞与分离的ADNVs孵育24h。MTT实验测定细胞活力，显示ADNVs处理的THP-1样品组活细胞比例明显高于对照组，NCTC L929细胞吸光度值基本相同。接下来测定细胞内外乳酸脱氢酶(LDH)活性，观察其对细胞膜损伤的影响。结果显示LDH在两种细胞类型中都很好的存在，在细胞外环境中则完全不存在，证实了ADNVs没有诱导任何类型的细胞损伤。
4. 差异miRNA表达分析与T靶基因预测
在6个样本中，通过下一代测序(NGS)鉴定出miRNAs，筛选差异表达的miRNAs，并比较差异表达miRNAs的基因靶标。其中连接最多的节点是miR-146a-5p，其次是miR-30a-5p。
通过RT-qPCR检测ADNVs处理48小时和对照组中促炎(M1)表型极化标记基因的表达。以IL-8和IL-1b为M1标记。在ANDVs处理的样本中，IL-8和IL-1b均显著下调。TNFα可诱导IL-1b和IL-8炎症因子的表达，在生长培养基中加入(+TNFα)和不添加(-TNFα)的情况下，研究基因调控。结果显示，在有炎症和无炎症的情况下，adnvs处理的样本中IL-1b的相对表达均出现下调。然而，IL-8水平在+TNFα和adnvs处理的样本中显著升高，在-TNFα样本中相同。
综上，ANDVs具有的抗炎作用主要由miRNA-146a通过抑制NF-kb通路负向调节促炎细胞因子的产生.
总结：
本研究测试了ADNVs的生物学特性和生物学效应，证实了ADNVs治疗的安全性。ADNVs可从不同角度发挥作用，在多个细胞系中诱导抗炎症信号，显示出与免疫系统直接对话的能力，具有很高的临床潜力。基于研究结果推测，每天摄入苹果可以摄入小剂量的天然抗炎物质，确保炎症过程的控制，尤其是在炎症初期。