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公司新闻/正文
CircWHSC1通过调节miR-145和miR-1182调节MUC1和hTERT来促进卵巢癌进展
1013 人阅读发布时间：2020-02-20 14:47
研究表明circRNA与多种疾病有关，具有潜在的诊断标志物作用，且在外泌体中稳定富集。卵巢癌是最致命的妇科恶性肿瘤，但缺乏关于circRNA在卵巢癌中的特定功能研究，去年10月份发表在J Exp Clin Cancer Res (IF=5.646)杂志上的一篇文章探究了这一过程，并发现了circWHSC1通过调节miR-145和miR-1182调节MUC1和hTERT来促进卵巢癌进展。
文章链接：https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6822369/
技术路线：
研究结果：
1.circWHSC1表达与上皮性卵巢癌的相关性
基于circRNA microarray筛选出hsa_circ_0001387在卵巢癌中高表达。Q-PCR检测circWHSC1在卵巢癌组织中的表达高于正常卵巢（Figure 1A），同时与癌症分化程度呈现正相关（Figure 1B）。表明circWHSC1可能与卵巢癌的发生有关。
Figure 1 circWHSC1表达与上皮性卵巢癌的发展和进展的相关性
2.circWHSC1促进卵巢癌细胞增殖，迁移和侵袭能力
circWHSC1在OVCAR3细胞中高表达，在CAOV3细胞中低表达（Figure 1C）。在CAOV3析中过表达circWHSC1，在OVCAR3细胞中沉默circWHSC1（Figure 1E）。circWHSC1的过表达促进细胞增殖（Figure 2A），降低细胞凋亡（Figure 2C），促进细胞迁移和侵袭（Figure 2D,E）。而circWHSC1在OVCAR3细胞中沉默后表现出相反的结果（Figure 2B,D,F,H）。
Figure 2 circWHSC1对卵巢癌细胞活力、凋亡、迁移和侵袭能力的影响
3.circWHSC1的过表达促进体内肿瘤生长
与对照组相比，circWHSC1过表达的细胞在裸鼠体内显示出更快的生长速度和更大的肿瘤体积（Figure 3A,B），且在circWHSC1过表达的皮下异种肿瘤中circWHSC1是高表达（Figure 3C）。表明高表达的circWHSC1在卵巢癌的发生和发展中起重要作用。
Figure 3 circWHSC1对体内肿瘤生长的影响
4.circWHSC1 sponges miR-1182和miR-145
circRNA / miRNA的相互作用预测网站（https://circinteractome.nia.nih.gov/）预测出 miR-1182和miR-145上有circWHSC1的互补序列（Figure 4A），通过双荧光素酶报告基因实验和RNA pull-down技术证明circWHSC1直接与miR-1182和miR-145结合（Figure 4B,C）。
Figure 4 circWHSC1 sponges miR-1182和miR-145，并调节TERT和MUC1的表达
5.circWHSC1调节TERT和MUC1的蛋白表达
在CAOV3中circWHSC1过表达后，miR-1182的直接靶标TERT和MiR-145的直接靶标MUC1的表达水平增加，OVCAR3中沉默circWHSC1后，TERT和MUC1的表达水平降低（Figure 4D）。TERT和MUC1也在circWHSC1过表达的异种移植瘤中亦上调（Figure 4E）。
6.外泌体circWHSC1促进腹膜扩散并调节腹膜中MUC1的表达
作者分析circWHSC1存在于外泌体中，因此提取外泌体，对外泌体指标CD63，CD9，HSP70和TSG101进行Western blot分析（Figure 5A），对其形态进行TEM观察（Figure 5B）。与外泌体circWHSC1孵育HMrSV5细胞的形态被转换成成纤维细胞样（Figure 5D）,且N-钙粘蛋白和MUC1的表达上调，而E-钙粘蛋白表达下调（Figure 5C）。为探究外泌体circWHSC1在肿瘤腹膜扩散中的作用，将裸鼠腹膜内注射CAOV3细胞建模，每两天用circWHSC1外泌体或PBS处理。circWHSC1外泌体组在腹腔中肿瘤结节的数目显著增加（Figure 5E）。HE染色显示腹膜被单层间皮细胞覆盖，细胞间连接完整（Figure 5F）。外泌体circWHSC1的处理后，间皮细胞分布松散，肿瘤细胞浸润周围基质层反应性增厚（Figure 5G）。因此circWHSC1以外泌体的形式被腹膜间皮细胞吸收，并诱导其EMT变化。同时，诱导的MUC1高表达，促进肿瘤细胞与腹膜的粘附和腹膜扩散。
Figure 5 外泌体circWHSC1促进腹膜扩散并调节腹膜中MUC1的表达
总结：
作者发现在卵巢癌中高表达的circWHSC1可以结合miR-145和miR-1182，上调下游靶标MUC1和hTERT的表达，促进癌细胞的增殖和侵袭，也可以分泌到外泌体。另腹膜间皮细胞可以吸收富含circWHSC1的外泌体。该过程为肿瘤转移提供了有利条件，有助于肿瘤在腹膜腔内扩散并促进卵巢癌的进展。
文章链接：https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6822369/
技术路线：
研究结果：
1.circWHSC1表达与上皮性卵巢癌的相关性
基于circRNA microarray筛选出hsa_circ_0001387在卵巢癌中高表达。Q-PCR检测circWHSC1在卵巢癌组织中的表达高于正常卵巢（Figure 1A），同时与癌症分化程度呈现正相关（Figure 1B）。表明circWHSC1可能与卵巢癌的发生有关。
Figure 1 circWHSC1表达与上皮性卵巢癌的发展和进展的相关性
2.circWHSC1促进卵巢癌细胞增殖，迁移和侵袭能力
circWHSC1在OVCAR3细胞中高表达，在CAOV3细胞中低表达（Figure 1C）。在CAOV3析中过表达circWHSC1，在OVCAR3细胞中沉默circWHSC1（Figure 1E）。circWHSC1的过表达促进细胞增殖（Figure 2A），降低细胞凋亡（Figure 2C），促进细胞迁移和侵袭（Figure 2D,E）。而circWHSC1在OVCAR3细胞中沉默后表现出相反的结果（Figure 2B,D,F,H）。
Figure 2 circWHSC1对卵巢癌细胞活力、凋亡、迁移和侵袭能力的影响
3.circWHSC1的过表达促进体内肿瘤生长
与对照组相比，circWHSC1过表达的细胞在裸鼠体内显示出更快的生长速度和更大的肿瘤体积（Figure 3A,B），且在circWHSC1过表达的皮下异种肿瘤中circWHSC1是高表达（Figure 3C）。表明高表达的circWHSC1在卵巢癌的发生和发展中起重要作用。
Figure 3 circWHSC1对体内肿瘤生长的影响
4.circWHSC1 sponges miR-1182和miR-145
circRNA / miRNA的相互作用预测网站（https://circinteractome.nia.nih.gov/）预测出 miR-1182和miR-145上有circWHSC1的互补序列（Figure 4A），通过双荧光素酶报告基因实验和RNA pull-down技术证明circWHSC1直接与miR-1182和miR-145结合（Figure 4B,C）。
Figure 4 circWHSC1 sponges miR-1182和miR-145，并调节TERT和MUC1的表达
5.circWHSC1调节TERT和MUC1的蛋白表达
在CAOV3中circWHSC1过表达后，miR-1182的直接靶标TERT和MiR-145的直接靶标MUC1的表达水平增加，OVCAR3中沉默circWHSC1后，TERT和MUC1的表达水平降低（Figure 4D）。TERT和MUC1也在circWHSC1过表达的异种移植瘤中亦上调（Figure 4E）。
6.外泌体circWHSC1促进腹膜扩散并调节腹膜中MUC1的表达
作者分析circWHSC1存在于外泌体中，因此提取外泌体，对外泌体指标CD63，CD9，HSP70和TSG101进行Western blot分析（Figure 5A），对其形态进行TEM观察（Figure 5B）。与外泌体circWHSC1孵育HMrSV5细胞的形态被转换成成纤维细胞样（Figure 5D）,且N-钙粘蛋白和MUC1的表达上调，而E-钙粘蛋白表达下调（Figure 5C）。为探究外泌体circWHSC1在肿瘤腹膜扩散中的作用，将裸鼠腹膜内注射CAOV3细胞建模，每两天用circWHSC1外泌体或PBS处理。circWHSC1外泌体组在腹腔中肿瘤结节的数目显著增加（Figure 5E）。HE染色显示腹膜被单层间皮细胞覆盖，细胞间连接完整（Figure 5F）。外泌体circWHSC1的处理后，间皮细胞分布松散，肿瘤细胞浸润周围基质层反应性增厚（Figure 5G）。因此circWHSC1以外泌体的形式被腹膜间皮细胞吸收，并诱导其EMT变化。同时，诱导的MUC1高表达，促进肿瘤细胞与腹膜的粘附和腹膜扩散。
Figure 5 外泌体circWHSC1促进腹膜扩散并调节腹膜中MUC1的表达
总结：
作者发现在卵巢癌中高表达的circWHSC1可以结合miR-145和miR-1182，上调下游靶标MUC1和hTERT的表达，促进癌细胞的增殖和侵袭，也可以分泌到外泌体。另腹膜间皮细胞可以吸收富含circWHSC1的外泌体。该过程为肿瘤转移提供了有利条件，有助于肿瘤在腹膜腔内扩散并促进卵巢癌的进展。