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公司新闻/正文
缺血性卒中小鼠M2小胶质细胞来源细胞外囊泡通过miR124/STAT3减少胶质瘢痕形成
656 人阅读发布时间：2021-06-23 10:28
【关键词】星形胶质细胞、胶质瘢痕、缺血性卒中、小胶质细胞、小细胞外囊泡
【摘要】胶质瘢痕是卒中患者神经再生的一个阻碍，小胶质细胞与星形胶质细胞之间的交互作用影响瘢痕形成，但是具体的机制仍有待研究。卒中小鼠术后1-7天尾静脉注射M2小胶质细胞来源的sEVs后检测胶质瘢痕、缺血灶大小、神经功能评分。M2小胶质细胞来源的sEVs通过miR124调节STAT3减少星形胶质细胞增殖，降低星形胶质细胞Notch1、增加Sox2表达。结果表明，M2星形胶质细胞来源的sEVs可调节胶质瘢痕形成，可作为卒中的治疗靶点。
【前言】胶质瘢痕是阻碍轴突再生和功能恢复的主要障碍，胶质瘢痕主要是小胶质细胞增殖伴随活化的星形胶质细胞，STAT3在脑损伤后可调节星形胶质增生。小胶质细胞和星形胶质细胞共同参与胶质瘢痕的形成，小胶质细胞作为中枢神经系统中的免疫细胞，在应对不同的免疫微环境会呈现出不同的极化状态：促炎型M1和抗炎型M2，其中M2小胶质细胞可促进组织损伤恢复，目前小胶质细胞如何调节瘢痕形成的机制仍然不清楚，而且M2小胶细胞在其中的作用也是未知的。
小细胞外囊泡（sEVs）目前是细胞间交互作用的重要媒介，通过递送miRNAs、脂质、蛋白质等参与细胞间通讯。M2小胶质细胞来源的EVs对损伤修复又促进作用，基于之前的筛选结果，M2小胶质细胞来源的sEVs富含miR124，而STAT3也是miR124的主要靶标，STAT3负责星形胶质细胞的增生，参与胶质瘢痕的形成，因此提出假设，M2小胶质细胞来源的sEVs通过miR124调控STAT3从而调节胶质瘢痕形成。
【结果】
首先诱导小胶质细胞的M2极化，免疫荧光和WB进行验证。分离M2小胶质细胞来源的sEVs并进行TEM和NTA的表征。
IF蛋白表达是星形胶质增生的特征性蛋白，检测M2-sEVs对IF蛋白表达影响来反应胶质瘢痕的影响。PKH26标记M2-sEVs后，验证星形胶质细胞对sEVs的摄取。结果表明：星形胶质细胞可摄取M2-sEVs，进而影响胶质瘢痕形成。
星形胶质细胞的迁移和增殖是胶质瘢痕形成的主要方式，因此检测M2-sEVs对星形胶质细胞迁移、增殖的影响。
M2-sEVs处理后的小鼠，免疫荧光显示活化的星形胶质细胞Sox2和nestin表达增加，表明星形胶质细胞被重塑为母细胞，进一步做WB验证Sox2和nestin表达，构建转基因小鼠验证活化的星形胶质细胞转分化为神经祖细胞。
sEVs通常通过递送miRNA发挥作用，因此筛选M2-sEVs中发挥作用的miRNA，miR124在脑损伤后下调，M2-sEVs处理后上调。慢病毒干扰M2-sEVs中miR124表达，结果显示M2-sEVs处理脑损伤小鼠后，只有miR124表达下调，表明miR124是主要发挥作用的miRNA。
探究M2-sEVs中miR124在胶质瘢痕形成过程中的作用，干扰M2-sEVs中miR124后回输至脑损伤小鼠，GFAP染色检测胶质瘢痕形成，体外检测星形胶质细胞的增殖和迁移。
通过数据库筛选miR124下游的靶标，其中STAT3是miR124作用的蛋白。WB验证STAT3和p-STAT3表达，将M2-sEVs中miR124干扰后回输至小鼠，随后检测STAT3和p-STAT3表达，nestin、Sox2、Notch1表达验证之前的实验结果。
验证M2-sEVs主要通过miR124发挥作用，按sham、PBS、M2-sEV和miR-124-kd分组，评估回输后小鼠的存活情况、神经功能恢复情况、肌肉的协调性等。zui终结果表明：M2-sEVs是通过miR124发挥作用的。
【前言】胶质瘢痕是阻碍轴突再生和功能恢复的主要障碍，胶质瘢痕主要是小胶质细胞增殖伴随活化的星形胶质细胞，STAT3在脑损伤后可调节星形胶质增生。小胶质细胞和星形胶质细胞共同参与胶质瘢痕的形成，小胶质细胞作为中枢神经系统中的免疫细胞，在应对不同的免疫微环境会呈现出不同的极化状态：促炎型M1和抗炎型M2，其中M2小胶质细胞可促进组织损伤恢复，目前小胶质细胞如何调节瘢痕形成的机制仍然不清楚，而且M2小胶细胞在其中的作用也是未知的。
小细胞外囊泡（sEVs）目前是细胞间交互作用的重要媒介，通过递送miRNAs、脂质、蛋白质等参与细胞间通讯。M2小胶质细胞来源的EVs对损伤修复又促进作用，基于之前的筛选结果，M2小胶质细胞来源的sEVs富含miR124，而STAT3也是miR124的主要靶标，STAT3负责星形胶质细胞的增生，参与胶质瘢痕的形成，因此提出假设，M2小胶质细胞来源的sEVs通过miR124调控STAT3从而调节胶质瘢痕形成。
【结果】
首先诱导小胶质细胞的M2极化，免疫荧光和WB进行验证。分离M2小胶质细胞来源的sEVs并进行TEM和NTA的表征。