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公司新闻/正文
外泌体介导的lncRNA HOTTIP通过调节HMGA1/miR-218轴促进胃癌细胞顺铂耐药性
310 人阅读发布时间：2021-07-29 09:50
关键词：胃癌，顺铂耐药，HOTTIP，外泌体，HMGA1，miR-218
摘要：化疗耐药性已成为肿瘤临床治疗的主要障碍。据报道，长链非编码 RNA (lncRNA) 在包括胃癌 (GC) 在内的各种肿瘤的化学抗性发展中发挥关键作用。然而，在顺铂耐药GC细胞中，然而，在顺铂耐药的 GC 细胞中，细胞外泌体lncRNA-HOXA远端转录体(HOTTIP) 的作用仍然未知。因此，这项研究探讨了外泌体传输的 HOTTIP 对 GC 细胞顺铂耐药性的影响。该研究发现外泌体 HOTTIP 通过调节 miR-218/HMGA1 轴促进 GC 细胞对顺铂的耐药性，为治疗 GC 提供了一条新途径。
前言：
外泌体是一种由细胞内多泡体与细胞膜融合产生的纳米级小囊泡，直径为40~100 nm。近年来，外泌体在生物标志物发现领域备受关注。据报道来自化学敏感或耐药细胞的外泌体可能会通过转移特定基因（包括lncRNAs）来影响治疗反应。众所周知，lncRNAs可以作为 miRNAs的分子海绵来调节相关基因的表达。生物信息学分析发现了 miR-218 和HOTTIP或HMGA1之间的潜在结合位点。这些结果表明HOTTIP 可能通过海绵 miR-218 调节 HMGA1 表达来影响顺铂耐药性。
结果：
该研究构建了顺铂耐药细胞系来探索顺铂耐药的潜在调控机制。与顺铂敏感性细胞系（MGC-803和MKN-45）相比，抗性细胞（MGC-803/DDP和MKN-45/DDP）的细胞活力和IC50值增加，表明耐药细胞对顺铂治疗的反应较小。Transwell 实验表明MGC-803/DDP和MKN-45/DDP细胞的细胞迁移和侵袭能力相比于MGC-803和MKN-45细胞显着增加。蛋白质印迹验证这些外泌体中EMT相关蛋白质水平。结果表明相比于MGC-803和MKN-45细胞，MGC-803/DDP和MKN-45/DDP细胞中E-钙粘附蛋白的蛋白水平显着降低，而N-钙粘蛋白和波形蛋白的表达水平升高。此外，通过qRT-PCR 测定 HOTTIP 表达来检验顺铂耐药性对HOTTIP表达的影响。结果表明抗性细胞（MGC-803/DDP 和 MKN-45/DDP）中的 HOTTIP 水平相比于敏感细胞（MGC-803 和 MKN-45）显着增强。这些结果表明 HOTTIP 的高表达可能与 GC 细胞中的顺铂抗性有关。
CCK-8试验表明，干扰HOTTIP明显抑制了MGC-803/DDP和MKN-45/DDP细胞中细胞增殖，并降低了IC 50值。此外，抑制 HOTTIP能促进 MGC-803/DDP 和 MKN-45/DDP 细胞中E-钙粘附蛋白表达和降低N-钙粘蛋白和波形蛋白丰度。这些结果表明HOTTIP 下调可以增加 MGC-803/DDP 和 MKN-45/DDP 细胞对顺铂敏感。
细胞外 HOTTIP 可以掺入外泌体并传递给敏感细胞，从而传播顺铂耐药性。
为了进一步验证外泌体HOTTIP与顺铂耐药性有关，将MGC-803和MKN-45细胞与PBS、外泌体（来源于MGC-803/DDP或 MKN-45/DDP）、外泌体 + si-NC 或外泌体 + si-HOTTIP#1一起孵育。然后，通过qRT-PCR分析HOTTIP的丰度；使用CCK-8测定评估细胞增殖；Transwell 测定用于评估细胞迁移和侵袭能力；蛋白质印迹分析评估E-钙粘蛋白、N-钙粘蛋白和波形蛋白的蛋白质丰度。这些结果表明外泌体介导的HOTTIP传播在GC细胞中诱导顺铂耐药性。
据报道lncRNAs可以作为ceRNAs来调节miRNAs的目标mRNAs。本研究使用生物信息学软件预测miR-218与HOTTIP或HMGA1之间的相互作用，并由双荧光素酶报告基因和RNA免疫沉淀 (RIP) 分析证实。结果表明HOTTIP作为miR-218的海绵来调节GC细胞中 HMGA1的表达。
最后，通过定量实时聚合酶链反应(qRT-PCR)测量HOTTIP、microRNA-218 (miR-218) 和HMGA1的表达水平，并通过ROC曲线分析外泌体HOTTIP对接受顺铂治疗的GC患者的诊断价值。结果表明血清外泌体HOTTIP可能作为GC患者有希望的诊断生物标志物。
参考文献：Wang J, Lv B, Su Y, Wang X, Bu J, Yao L. Exosome-Mediated Transfer of lncRNA HOTTIP Promotes Cisplatin Resistance in Gastric Cancer Cells by Regulating HMGA1/miR-218 Axis. Onco Targets Ther. 2019 Dec 20;12:11325-11338. doi: 10.2147/OTT.S231846. PMID: 31908497; PMCID: PMC6930390.
摘要：化疗耐药性已成为肿瘤临床治疗的主要障碍。据报道，长链非编码 RNA (lncRNA) 在包括胃癌 (GC) 在内的各种肿瘤的化学抗性发展中发挥关键作用。然而，在顺铂耐药GC细胞中，然而，在顺铂耐药的 GC 细胞中，细胞外泌体lncRNA-HOXA远端转录体(HOTTIP) 的作用仍然未知。因此，这项研究探讨了外泌体传输的 HOTTIP 对 GC 细胞顺铂耐药性的影响。该研究发现外泌体 HOTTIP 通过调节 miR-218/HMGA1 轴促进 GC 细胞对顺铂的耐药性，为治疗 GC 提供了一条新途径。
前言：
外泌体是一种由细胞内多泡体与细胞膜融合产生的纳米级小囊泡，直径为40~100 nm。近年来，外泌体在生物标志物发现领域备受关注。据报道来自化学敏感或耐药细胞的外泌体可能会通过转移特定基因（包括lncRNAs）来影响治疗反应。众所周知，lncRNAs可以作为 miRNAs的分子海绵来调节相关基因的表达。生物信息学分析发现了 miR-218 和HOTTIP或HMGA1之间的潜在结合位点。这些结果表明HOTTIP 可能通过海绵 miR-218 调节 HMGA1 表达来影响顺铂耐药性。
结果：
该研究构建了顺铂耐药细胞系来探索顺铂耐药的潜在调控机制。与顺铂敏感性细胞系（MGC-803和MKN-45）相比，抗性细胞（MGC-803/DDP和MKN-45/DDP）的细胞活力和IC50值增加，表明耐药细胞对顺铂治疗的反应较小。Transwell 实验表明MGC-803/DDP和MKN-45/DDP细胞的细胞迁移和侵袭能力相比于MGC-803和MKN-45细胞显着增加。蛋白质印迹验证这些外泌体中EMT相关蛋白质水平。结果表明相比于MGC-803和MKN-45细胞，MGC-803/DDP和MKN-45/DDP细胞中E-钙粘附蛋白的蛋白水平显着降低，而N-钙粘蛋白和波形蛋白的表达水平升高。此外，通过qRT-PCR 测定 HOTTIP 表达来检验顺铂耐药性对HOTTIP表达的影响。结果表明抗性细胞（MGC-803/DDP 和 MKN-45/DDP）中的 HOTTIP 水平相比于敏感细胞（MGC-803 和 MKN-45）显着增强。这些结果表明 HOTTIP 的高表达可能与 GC 细胞中的顺铂抗性有关。
CCK-8试验表明，干扰HOTTIP明显抑制了MGC-803/DDP和MKN-45/DDP细胞中细胞增殖，并降低了IC 50值。此外，抑制 HOTTIP能促进 MGC-803/DDP 和 MKN-45/DDP 细胞中E-钙粘附蛋白表达和降低N-钙粘蛋白和波形蛋白丰度。这些结果表明HOTTIP 下调可以增加 MGC-803/DDP 和 MKN-45/DDP 细胞对顺铂敏感。
细胞外 HOTTIP 可以掺入外泌体并传递给敏感细胞，从而传播顺铂耐药性。
为了进一步验证外泌体HOTTIP与顺铂耐药性有关，将MGC-803和MKN-45细胞与PBS、外泌体（来源于MGC-803/DDP或 MKN-45/DDP）、外泌体 + si-NC 或外泌体 + si-HOTTIP#1一起孵育。然后，通过qRT-PCR分析HOTTIP的丰度；使用CCK-8测定评估细胞增殖；Transwell 测定用于评估细胞迁移和侵袭能力；蛋白质印迹分析评估E-钙粘蛋白、N-钙粘蛋白和波形蛋白的蛋白质丰度。这些结果表明外泌体介导的HOTTIP传播在GC细胞中诱导顺铂耐药性。
据报道lncRNAs可以作为ceRNAs来调节miRNAs的目标mRNAs。本研究使用生物信息学软件预测miR-218与HOTTIP或HMGA1之间的相互作用，并由双荧光素酶报告基因和RNA免疫沉淀 (RIP) 分析证实。结果表明HOTTIP作为miR-218的海绵来调节GC细胞中 HMGA1的表达。
参考文献：Wang J, Lv B, Su Y, Wang X, Bu J, Yao L. Exosome-Mediated Transfer of lncRNA HOTTIP Promotes Cisplatin Resistance in Gastric Cancer Cells by Regulating HMGA1/miR-218 Axis. Onco Targets Ther. 2019 Dec 20;12:11325-11338. doi: 10.2147/OTT.S231846. PMID: 31908497; PMCID: PMC6930390.