多年来，肺损伤在世界范围内危害着人类健康，探索其发病机制并及时干预是十分必要的。Ficolin B (Fcn B)是一种能够识别多种配体的识别分子，在调节肺细胞周期、免疫反应和组织稳态等方面发挥重要作用。然而，Fcn B在博来霉素(BLM)诱导的肺损伤中的作用尚不清楚。湾湾今日分享的一篇发表在【Cell Death Disease】上题为“Ficolin B secreted by alveolar macrophage exosomes exacerbates bleomycin-induced lung injury via ferroptosis through the cGAS-STING signaling pathway”的研究，本研究旨在探讨Fcn B的来源及其在blm致肺损伤中的作用机制。该研究表明，AMs外泌体转运的Fcn B通过cGAS-STING信号通路促进肺上皮细胞铁凋亡，从而加剧BLM诱导的肺损伤。

研究结果

1.巨噬细胞来源的Fcn B加重BLM诱导的肺损伤和纤维化

图1A：采用生化试剂盒检测血浆中L-ficolin和M-ficolin的浓度。

图1B：BLM诱导后小鼠的存活曲线。

图1C：HE染色观察肺组织病理改变。

图1D：Masson染色检测肺间质纤维化。

图1E-F：采用生化试剂盒测定肺组织BALF总蛋白和羟脯氨酸浓度。

图1G：Western blot检测大鼠肺组织α-SMA的表达水平。

图1H-I：流式细胞术检测肺巨噬细胞和中性粒细胞中Fcn B阳性细胞的百分比。

以上结果证明，巨噬细胞来源的Fcn B加重了BLM诱导的肺损伤和纤维化。

 

2.Fcn B促进BLM诱导的肺损伤模型的自噬和铁死亡

图2A：Western blot检测大鼠肺组织LC3II/LC3I、Beclin1、ATG7、p62的表达。

图2B：采用生化试剂盒检测肺组织和血清中MDA、GSH、Fe2+的浓度。

图2C：流式细胞术检测肺组织ROS水平。

图2D-E：Western blot检测肺组织中GPX4、SLC7A11、FTH1、FTL1、NCOA4的表达。

以上结果表明，Fcn B在BLM诱导的肺损伤模型中可以促进自噬和铁死亡。

 

3.BLM诱导的AMs外泌体增加Fcn B表达，促进肺上皮细胞自噬和铁死亡

图3A：RT-qPCR检测Fcn B mRNA在AMs中的表达。

图3B：Transwell共培养系统示意图。

图3C：RT-qPCR检测肺上皮细胞中Fcn B mRNA的表达。

图3D-E：Western blot检测肺上皮细胞LC3II/LC3I、Beclin1、ATG7、p62的表达。

图3F-G：采用生化试剂盒检测肺上皮细胞中MDA、GSH、Fe2+的浓度。

图3H：流式细胞术检测肺上皮细胞ROS水平。

图3I：采用LDH法测定肺上皮细胞死亡率。

图3J-K：Western blot检测肺上皮细胞中GPX4、SLC7A11、FTH1、FTL1、NCOA4的表达。

以上结果表明，Fcn B在AMs中的调节可能是参与自噬和铁死亡的机制，从而减轻BLM诱导的肺上皮细胞损伤。

 

4.BLM诱导的AMs通过外泌体转运的Fcn B介导肺上皮细胞自噬和铁死亡

图4A：通过NTA法检测外泌体的粒径。

图4B：通过TEM观察外泌体的形态。

图4C：Western blot检测外泌体中CD9、CD63和CD81的表达。

图4D：外泌体摄取实验。

图4E-F：RT-qPCR检测肺上皮细胞中Fcn B mRNA的表达。

图4G-H：Western blot检测肺上皮细胞LC3II/LC3I、Beclin1、ATG7、p62的表达。

图4I：采用生化试剂盒检测肺上皮细胞中MDA、GSH、Fe2+的浓度。

图4J：流式细胞术检测肺上皮细胞ROS水平。

图4K：采用LDH法测定肺上皮细胞死亡率。

图4L-M：Western blot检测肺上皮细胞中GPX4、SLC7A11、FTH1、FTL1、NCOA4的表达。

以上结果表明，BLM诱导的AMs通过外泌体转运的Fcn B介导肺上皮细胞自噬和铁死亡。

 

5.来自BLM诱导AMs外泌体的Fcn B通过cGAS-STING途径促进肺上皮细胞自噬和铁死亡

图5A-B：Western blot检测肺上皮细胞中cGAS、STING、p-STING的表达。

图5C：Western blot检测LC3I、LC3II、Beclin1、ATG7、p62在肺上皮细胞中的表达。

图5D-E：采用生化试剂盒检测肺上皮细胞中MDA、GSH、Fe2+的浓度。

图5F：流式细胞术检测肺上皮细胞ROS水平。

图5G：采用LDH法测定肺上皮细胞死亡率。

图5H-I：Western blot检测肺上皮细胞中GPX4、SLC7A11、FTH1、FTL1、NCOA4的表达。

以上结果表明，cGAS-STING途径介导了由BLM诱导的AMs外泌体Fcn B促进的肺上皮细胞自噬和铁死亡。

 

6.来自BLM诱导AMs外泌体的Fcn B通过cGAS-STING途径促进肺上皮细胞铁死亡是自噬依赖性的

图6A：透射电镜检测线粒体损伤和自噬体(黄色箭头为正常线粒体，红色箭头为损伤线粒体，蓝色箭头为自噬体)。

图6B：Western blot检测肺上皮细胞LC3II/LC3I、Beclin1、ATG7、p62的表达。

图6C-D：采用生化试剂盒检测肺上皮细胞中MDA、GSH、Fe2+的浓度。

图6E：流式细胞术检测肺上皮细胞ROS水平。

图6F：采用LDH法测定肺上皮细胞死亡率。

图6G-H：Western blot检测肺上皮细胞中GPX4、SLC7A11、FTH1、FTL1、NCOA4的表达。

以上结果表明，抑制自噬可通过cGAS-STING途径减轻BLM诱导的AMs外泌体Fcn B诱导的肺上皮细胞铁死亡。

 

7.在BLM诱导的小鼠模型中，AMs外泌体转运的Fcn B通过铁死亡促进肺损伤和纤维化

图7A：HE染色观察肺组织病理改变。

图7B：Masson染色检测肺间质纤维化。

图7C-D：采用生化试剂盒检测肺组织BALF总蛋白和羟脯氨酸浓度。

图7E：Western blot检测大鼠肺组织α-SMA的表达。

图8A：透射电镜检测线粒体损伤和自噬体(红箭头表示损伤的线粒体)。

图8B：Western blot检测大鼠肺组织LC3II/LC3I、Beclin1、ATG7、p62的表达。

图8C-D：采用生化试剂盒检测肺组织和血清中MDA、GSH、Fe2+的浓度。

图8E：流式细胞术检测肺组织ROS水平。

图8F-G：Western blot检测肺组织中GPX4、SLC7A11、FTH1、FTL1、NCOA4的表达。

图8H：Western blot检测肺组织中cGAS、STING、p-STING的表达。

以上结果表明，从AMs外泌体转运的Fcn B通过铁死亡促进BLM诱导小鼠模型的肺损伤和纤维化。

 

结论

综上所述，作者的研究结果表明Fcn B通过cGAS-STING途径加重了BLM诱导的肺损伤。本研究将丰富对Fcn B在肺损伤中的作用的认识，为BLM致肺损伤发生发展的分子机制提供线索，为其临床治疗提供新的靶点。